1. การจุ่มขี้ผึ้ง
เนื้อเยื่อที่โปร่งใสจะต้องได้รับการแว็กซ์เพื่อแทนที่สารโปร่งใส (เช่นไซลีน) ด้วยขี้ผึ้งพาราฟินเพื่อให้ขี้ผึ้งพาราฟินสามารถเจาะเข้าไปในเนื้อเยื่อและให้การสนับสนุนสำหรับการหั่น
ขั้นตอนการดำเนินงาน: วางเนื้อเยื่อที่โปร่งใสในแว็กซ์พาราฟินละลายโดยปกติจะอยู่ที่ประมาณ 60 องศาเพื่อให้แน่ใจว่าขี้ผึ้งพาราฟินสามารถเจาะเข้าไปในเนื้อเยื่อได้อย่างเต็มที่
หมายเหตุ: เวลาจุ่มขี้ผึ้งจะต้องปรับตามขนาดและประเภทของเนื้อเยื่อโดยทั่วไป 1-2 ชั่วโมง
2. หั่น
เนื้อเยื่อขี้ผึ้งที่ถูกทำให้ชื้นจำเป็นต้องถูกหั่นสำหรับการย้อมสีและการสังเกตที่ตามมา
ขั้นตอนการทำงาน: ใช้ตัวแบ่งส่วนที่ตัดเนื้อเยื่อเป็นชิ้นบาง ๆ โดยทั่วไป 4-6 ไมครอนหนา
หมายเหตุ: ตรวจสอบให้แน่ใจว่าใบมีดคมเมื่อหั่นเพื่อหลีกเลี่ยงการฉีกขาดหรือการเสียรูปของเนื้อเยื่อ
3. การย้อมสี
หลังจากการหั่นแล้วการย้อมสีจะต้องทำให้ส่วนต่าง ๆ ของเนื้อเยื่อแสดงสีที่แตกต่างกันเพื่อการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่ง่าย
ขั้นตอนการดำเนินงาน: วางชิ้นในโซลูชันการย้อมสี วิธีการย้อมสีทั่วไป ได้แก่ การย้อมสี hematoxylin-eosin (การย้อมสี H&E)
หมายเหตุ: ต้องปรับเวลาการย้อมสีตามวิธีการย้อมสีและประเภทเนื้อเยื่อเพื่อหลีกเลี่ยงการย้อมสีมืดหรือเบาเกินไป
4. การปิดผนึก
หลังจากการย้อมสีต้องปิดผนึกชิ้นเพื่อปกป้องชิ้นและอำนวยความสะดวกในการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์
ขั้นตอนการดำเนินการ: ใช้โซลูชันการปิดผนึกเพื่อแก้ไขชิ้นบนสไลด์แล้วครอบคลุมด้วยผ้าคลุม
หมายเหตุ: หลีกเลี่ยงการสร้างฟองอากาศเมื่อปิดผนึกและตรวจสอบให้แน่ใจว่าโซลูชันการปิดผนึกครอบคลุมชิ้น
5. การถ่ายภาพและการสังเกต
หลังจากปิดผนึกชิ้นสามารถถ่ายภาพและสังเกตได้โดยใช้กล้องจุลทรรศน์
ขั้นตอนการทำงาน: วางชิ้นที่ปิดสนิทไว้ใต้กล้องจุลทรรศน์ปรับโฟกัสและความสว่างและสังเกตและถ่ายภาพ
หมายเหตุ: ในระหว่างกระบวนการสังเกตให้ให้ความสนใจกับการปรับกำลังขยายและรูรับแสงของกล้องจุลทรรศน์เพื่อให้ได้ผลการสังเกตที่ดีที่สุด
